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b. 能识别一个抗原上的多个表位,可在IP等实验中获得更好的结果。
c. 多抗因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子,有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。
d. 能识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质,或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白,例如当未测试物种中的抗原性质未知时,有时会使用多克隆抗体。e. 可识别多个结构域,即使原始抗原的一些空间结构或者序列发生小变化或者部分抗原决定簇变化,仍可以识别抗原,因此有更大的适应性。
b. 产生大量的非特异性抗体,有时可能在某些应用里产生背景信号。
IHC:兔疫组化中需要进行固定一步, 固定是为了尽量让细胞的形态结构维持和原有的一致。这种化学物质的固定使蛋白
质变性凝固,与天然状态下的蛋白质有了一定的区别,但是又不同WB中加热变性变成了线性的结构。
IP/ChIP:这类实验是用抗体去结合生理状态下的蛋白质,因此IP和ChIP的抗体最好使用纯化的天然蛋白制作的抗体。
b. 从蛋白修饰来看:天然蛋白存在复杂的翻译后修饰。这点可以通过信息学分析进行解释。
c.从蛋白翻译后加工来看:翻译后蛋白前体经切割可能会使部分蛋白分子量偏小,而天然组织中同时存在蛋白前体和切割加工后的蛋白,二者序列有相同部分,可能会产生杂带。这点需要通过查阅与目的蛋白相关文献进行了解。
d.从同源家族蛋白来看:当目的蛋白有同源家族蛋白时,蛋白异构体的存在可能会使分子量偏离预测分子量,因为天然样本中由同一个mRNA不同的剪接方式进行翻译形成的蛋白产物也会有相同的抗原表位,同时被抗体识别时会产生杂带。
e. 从蛋白聚集形式来看:蛋白多聚体的形成,虽然还原条件可以抑制多聚体的形成,但是强烈的蛋白间相互作用在还原条件下也有可能不解聚导致条带偏大。