细胞自噬检测试剂盒（绿色荧光）

细胞自噬检测试剂盒（绿色荧光）

产品概述product description

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是溶酶体介导的胞内降解途

径，是真核细胞在恶劣环境(比如营养缺乏)威胁时引发的降解和细胞内容物再循环的过程。这一途径在对各种应激条件进行应答从而在促进细胞内环境平衡、能量平衡和细胞存活上具有重要的作用，更多的证据表明自噬功能与多种疾病密切相关,包括癌症、神经退行性疾病、糖尿病、自身免疫性疾病和心血管疾

病。细胞自噬检测试剂盒是采用MDC染色法染色细胞内自噬体的检测试剂盒,该产品可代替传统LC3-GFP法，通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自溶酶体，用于流式细胞仪,无需转染，就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行定量分析,或用流式细胞仪进行高通量筛选，甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析,为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。细胞自噬检测试剂盒中的BBcellProbe@ MDC自噬体染色探针为绿色荧光标记的自噬体探针，具有335nm / 518nm的最大激发/发射波长。可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、 细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

2-8°C避光

注意事项

2.染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后

离心至管底部再开盖。

有效期

检测方法

激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪

适用样本

动物细胞

产品特点

1.无需转染,可在活细胞内定量检测细胞自噬情况，可在活细胞内定量检测自噬小泡和监控活细胞自噬流(自噬体的合

成自噬底物到溶酶体的运输、自噬底物在溶酶体的降解过程);

2.适用于流式细胞检测和显微镜分析;

3.可用于高通量筛选自噬的激活剂和抑制剂;

4.可选择性地对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色,而对溶酶体染色较少。

产品应用

激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪

仪器准备

1.激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液2.HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.-次性手套

使用注意事项

1.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整 ，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、

胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

2.染色后立即进行分析。

3.本试剂采用紫外激发,不能用蓝光激发。

使用方法

1.染色工作液配制:

根据样本数量，用检测缓冲液将MDC荧光染料10倍稀释,再用相应的培养基或者HBSS缓冲液40-200倍稀释,配制成染

色工作液。

2.细胞染

2.1对于贴壁细胞

1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。

2)待细胞生长到合适丰度，吸除培养液, 加入适量37°C预热的含MDC探针工作液。于生长状态下孵育15分钟-1小时

(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。

3)利用新鲜培养基或PBS替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。

2.2对于悬浮细胞

1)离心,吸除上清。

2)利用37°C 预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育15分钟~ 1小时(具体时间需根据细胞类型而定)。

3)离心，吸除染色液,加入新鲜培养液或PBS重悬细胞。

4)置于荧光镜下观察或流式检测。

3.观察结果:

在荧光显微镜(含合适滤片) /酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。

最大激发/发射波长为335/518 nm。

常见问题分析

1.为什么488nm激发没有绿色荧光?

不同于大多数常见的488nm激发的绿色荧光染料，本自噬体绿色荧光探针应采用紫外光激发。

不能采用FITC的检测条件激发本自噬荧光探针。