核蛋白提取试剂盒

核蛋白提取试剂盒

产品概述product description

核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、 心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯

度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。本试剂盒 含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试齐盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定

等蛋白研究。如果下游应用是金属整和层析等不能含EDTA试剂的实验,可以联系贝博更换不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒提取的蛋白含高浓度盐,不可直接用于2D电泳，需要透析、 脱盐后在用于2D电泳。 如下游实验需要直接用于2D电泳，请

使用其他货号的试剂盒。

保存温度

2-8°C

注意事项

1.蛋白酶抑制剂末开盖使用前也可以2-8°C储存。开盖使用后20°C储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8°C低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37°C短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部

3.试剂拆封后请尽快使用完!

有效期

检测方法

WB,IP等

适用样本

动物细胞/组织

产品特点

1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟- 1小时。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、

Aprotinin、Leupeptin、 Pepstatin A、Bestatin、 E-64, 每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。 该混合

物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨

酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.-次性手套

使用注意事项

使用注意事项: .

0旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

0蛋白酶抑制剂在2-8°C时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37°C短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开

0实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20°C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

0蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

0如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以-次全部加入提取液。

0可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

0下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程

保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

细胞蛋白提取

1.提取液制备:

每500 u冷的蛋白提取液A加入1 u蛋白酶抑制剂混合物和1 μI磷酸酶抑制剂。

每200 ul冷的蛋白提取液B中加入1 μ蛋白酶抑制剂混合物和1 μl磷酸酶抑制剂,混匀后置冰上备用。

2.取5-10x106个细胞，在4°C , 500xg力条件 下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。

3.用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。

4.每20 μul体积细胞沉淀(约20 mg, 2x106个细胞) 中加入200-300 u冷的提取液A,高速涡旋振荡混匀或吹打混匀,

置2-8°C条件振荡10-30分钟。

5.然后在4°C, 2000xg条件 下离心5分钟。

6.将上清吸入另-预冷的干净离心管, 即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80°C冰箱保存备用。

7.在沉淀中加入80-200 u冷的提取液B,高速涡旋振荡15秒。

8.置2-8°C条件振荡30-40分钟。

9. 在4°C, 12000xg条件下离心10分钟。

10.将上清吸入另-预冷的干净离心管, 即可得到核蛋白。

11. 将.上述蛋白提取物定量后分装于-80°C冰箱保存备用或直接用于下游实验。