膜蛋白提取试剂盒

膜蛋白提取试剂盒

产品概述product description

膜蛋白提取试剂盒是一-种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。 本试剂盒提供全套试剂，适用于从动物细胞和动物组织提取总膜蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。本试剂盒 含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒 提取的蛋白可用于Western Blotting. 蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、 转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA, 与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8°C

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8°C储存。开盖使用后-20°C储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8°C低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37°C短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部

3.试剂拆封后请尽快使用完!

有效期

检测方法

WB,IP等

适用样本

动物细胞/组织

产品特点

1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2.将蛋白提取的时间缩短至1小时。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种

抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。 该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨

酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

.-次性手套

使用注意事项

使用注意事项:

0旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

0蛋白酶抑制剂在2-8°C时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37C短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开

0实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放20°C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

0蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。

0如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

0可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

0下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋E 3酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程

保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

细胞蛋白提取

1.提取液准备:

每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μ蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。

每500μ膜蛋白溶解液C中加入2μ蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2.取5-10x106个以上细胞,在4C, 500xg条件 下离心3-5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。

4.细胞样品中加入200ul-400u冷的试剂A,充分混匀。

5.在2-8°C条件下振荡20-30分钟,至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。

6.在4°C, 12000xg条件下离心5分钟。

7.将上清吸入另-干净离心管,在37°C水浴5-10分钟。

8.在37°C, 1000xg力离心5分钟,此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50ul。

9. 小心移除上层液体,收集上层部分留作备用分析。

10.用150-200ul冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分,混匀后冰浴2分钟, 37°C水浴5-10分钟, 37°C, 1000xg力离心

5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50ul.小心移除上层液体,保留下层。

11.按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做，一般不需要做)。

12.用50-200ul冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分,即得膜蛋白。

13.将上述蛋白提取物定量后分装于- 80°C冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取

每500u冷的蛋白提取液A中加入2u蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

每500μ膜蛋白溶解液C中加入2μ蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2.取50mg-100mg适量组织样本,用冷PBS洗干净, 然后用手术剪刀尽可能剪碎，加400ul冷的试剂 A,用组织匀浆机/

器匀浆至无明显肉眼可见固体。

3.将组织匀浆吸入-预冷的干净离心管中, 在4'C条件下振荡20-30分钟。

4.按照细胞蛋白的提取方法的第5步骤往下操作即可。

常见问题分析

1.蛋白浓度低?

膜蛋白丰度比较低,在条件允许的情况下，需要尽可能加大细胞的上样量以提高膜蛋白浓度。

处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件

下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2.用什么方法定量蛋白?

建议用BCA法。