RIPA裂解液（蛋白裂解液）

RIPA裂解液（蛋白裂解液）

产品概述product description

保存温度

2-8°C

注意事项

使用注意事项:

口旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的波体

口实验过程中的所有试剂须预令;所有器真领的。做体能生管底，避免开盖时液体酒落。

口蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影室过程 须保持样品处于低温。

0如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制的有物的”中安H。

0可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制刘单日

一次全部加入提取液。

口下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测

提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程

保持低温操作,缩短离心时间。

有效期

1企

检测方法

WB、IP等

适用样本

细胞、组

产品特点

。便用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等萌处理。

口提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

u含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

口紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

。象再起据取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和喷蛋白， 又可结合程

。重上的拉制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。 蛋白藏机制治人民样中的蛋白防止沉淀。

preinin Leupeptin. PepstatinA. Bestatin. E-64, 每种抑制刘可性包业的蛋日酶抑制剂IAEBSF、

史兵的以科制 乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酚是白籍 业国口等法性。该混合

酰-氨基肽酶等。

半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨

产品应用

WB. IP等

仪器准备

0离心机

0振荡器

0匀浆机/匀浆器

0涡旋混勻器

0移液器

0冰箱

0冰盒

试剂准备

OPBS缓冲液(PH7.4, 实验室常用的10mM磷酸缓冲

PBS:约含8mM Na2HPO4. 2mMKHDPC

有酸缓冲盐溶液(1x) ) (phosphate bffer slni/0lbel 。

0蛋白定量试剂盒

耗材准备

0离心管

0吸头

0 -次性手套

使用方法

.细胞裂解

1.烈紹波制发.

每1ml冷的RIP/

BRPA裂解液中加入2 u蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

口样品用于测定某些细胞内蛋白酶、

磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况

，的 。10生日定收收为此步配制好的含 蛋白酶抑制剂的提取液。

3.用冷PBS法漆细胞4, 100xg条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细的

4胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。

[注

6个9胞中加入500山的的翻解液， 海与后，在4C条件下振15-20分钟。

山，或

2-个75。 1mg或山细胞沉淀体积,加1000 ul RIPA裂解液。大约相当于6孔柘的每儿

。康田北m。裂解液和细胞应充分接触。 如果RIPA裂解液不足是细的的HI~150

。天地出文低转速，提取液能轻微晃动即可。

5.在40C1

来件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间

中间每隔几分钟用移液器吹打

; C 1000000条件下离心10分钟。

6.快速将上清吸入另预令的干净离心管， 用于下游实验。

B. 组织裂解

1. 烈解海，

+打.

i每1n冷的RIPA裂解液加入2 山蛋白酶抑制混合物，混匀后置冰上备用。

0以下出。,庄的 肥内蛋日酶、 磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况

调整抑制剂混合物是否加入。

。m10 口定以液为此步配制好的含 蛋白酶抑制剂的提取液

3.将组织样本相碎。 加入1m裂解液，用组织匀浆器与浆至无明显肉眼可见固体。

[注) .

匀浆在4C振荡15-25分钟。

o使用振法

口使用振荡疆/摇床的较低转速，

提取液能轻微晃动即可。

4.在40

1200 可以不振荡，稍微延长提取液的外理时间,中间每隔几

日杨液器吹打混匀即可。

5.将上

12000xg条件下离心10分钟。

5.将上清吸入另一预冷的干净离心管, 用于下游实验。

[注]

还蛋日提取物可分装后于- 80°C冰箱保存备用。

“建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品: BB-3401.

口蛋日样品8C存放年没有问题。 注意不要接蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。

常见问题分析

0细胞裂解速度慢?

为了充分保证提取得到的蛋白的活性， 提取液采用独特的保护蛋白的配方

裂解能力温和，下游应用范围广。 适当延长裂

解的时间即可。

0蛋白浓度低?

处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低，

下处理， 没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混夕。

大要适当延长试剂A的处理时间即呵。最好在持续振荡的条件

口用什么方法定量蛋白?

建议用BCA法。 不适合用radford法,因为试剂A中含有于扰Brac

处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以Bradrord法定量。

Tord法的组份， 导致定量不准。如果已经进行过透析

0提取时出现胶状沉淀?

蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物, 属正常现象。 该话

和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接高心物力合有基

组DNA等的复合物。不检测

付别系密的蛋白，则可以通过超声处理, 300w/10种间隔10孙王题即印; 如果需要检测和基因组结合

见的转录因子，例n如N-appaB. p53等时， 不必进行超声处理。

t随石离心取上清用于后续实验。检测-些常

口提取的蛋白具有活性吗?

象和活性。