总蛋白提取试剂盒

总蛋白提取试剂盒

产品概述product description

总蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代培养动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、 肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织样品中提取总蛋白。配合其他试剂时，也可以用于植物、细菌、真菌、酵母等样品的总蛋白提

取。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份,包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、 转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞

实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

保存温度

2-8°C

注意事项

1.蛋白酶抑制剂末开盖使用前也可以2-8°C储存。开盖使用后-20°C储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8°C低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37°C短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部

开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完!

有效期

年

检测方法

WB,IP等

适用样本

动物细胞/组织

产品特点

2.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制剂抑制”了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、

Aprotinin、Leupeptin、 PepstatinA、 Bestatin、 E-64, 每-种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。 该混合

物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨

酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

0旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

蛋白酶抑制剂在2-8°C时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37*C短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开

实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20°C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

0蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用,溶解后正常使用。

如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

0下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程

保持低温操作,缩短离心时间。

离心机转速有相对离心力(RCF, xg) 和每分钟转速(RPM, r/min) 两种表示方式,有些离心机设置有RPM和xg显示

切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算: g=rx1.118x10-5xrpm2 (r 为有效离心半径，

即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如:转速为3000rpm,有效离心半径为10 cm,则相

对离心力(RCF, xg)为=10x1.118x10-5x 30002=1006.2 (xg) 。

使用方法

悬浮细胞蛋白提取:

1.提取液准备:

每500 u冷的总蛋白提取液中加入2 u蛋白酶抑制剂混合物和2 μ山l磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2.取5x106个细胞，在4°C, 2500xg条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。

3.用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。

4.每5x106 -1x107个细胞(大约50 mg细胞/50 μl细胞沉淀体积)中加入500 u岭的总蛋白提取液，吹打混匀后，在

4°C条件 下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解,无明显细胞沉淀。

5.在4°C, 12000xg条件下离心15分钟。

6.将上清吸入另-预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

7.将上述蛋白提取物定量后分装于-80°C冰箱保存备用或直接用于下游实验。